DuranHedt.com

Test immunoenzymatyczny (ELISA),

Test immunoenzymatyczny (ELISA),Test immunoenzymatyczny (ELISA), - współczesne badania laboratoryjne, w którym przeprowadzane jest wyszukiwanie swoistych przeciwciał w krwi lub antygenów do określonych chorób, w celu nie tylko zidentyfikować przyczyny, ale stadium choroby. Wyniki ELISA mogą być wydawane zarówno pod względem jakościowym i ilościowym.

Obecnie test ELISA stosuje się w następujących sytuacjach:

1) Szukaj swoistych przeciwciał do infekcji zabolevaniyu-
2) przeszukiwania dla antygenów chorobami (choroby zakaźne, wenerycznych) -
3) badanie stanu hormonalnego patsienta-
4) przesiewanie dla onkomarkery-
5) badanie obecności chorób autoimmunologicznych.

Zalety ELISA

1) wysoka specyficzność i czułość testu ELISA (ponad 90%).
2) Zdolność do oznaczania i monitorowania choroby dynamiki procesu, to porównanie ilości przeciwciał w różnych odstępach czasowych.
3) Test ELISA dostępność diagnostyczne w każdej instytucji medycznych.

Względny brak:

1) Detekcja odpowiedzi immunologicznej (przeciwciał), ale nie z patogenu.

podstawowe pojęcia

Przed wyjaśnić istotę metody ELISA, krótko to zrozumieć pewne koncepcje.
Przeciwciała lub immunoglobuliny (Ig) - - poszczególne białka wytwarzane przez B -
limfocyty (komórki układu odpornościowego), w odpowiedzi na wprowadzenie do organizmu patogenów zakaźnych (wirusów, bakterii, grzybów, itp.); Wydzielają immunoglobuliny A (IgA), immunoglobulinę E (IgE), immunoglobulinę M (IgM) immunoglobuliny G (IgG), immunoglobulinę D (IgD). Różnią się od siebie i tworzą Masa cząsteczkowa półtrwania / odstąpienie od udziału w procesach zakaźnych wykrywania czasu od chwili zakażenia. Jeśli weźmiemy pod uwagę masę cząsteczkową, najbardziej on IgM - jest to pentamer (950000 Da), w przeciwieństwie do reszty Ig (od 150 do 200 000 Da), więc po prostu IgM nie mogą przechodzić przez barierę łożyskową. Dlatego wykrywanie przeciwciał IgM w dziecko 1 roku życia jest zawsze oznaką infekcji u płodu. Większość immunoglobulin surowicy reprezentowane IgG (75-85%), a najniższa - IgE (0,003%). Proces zakaźne bezpośrednio zaangażowane biorąc tylko IgA, M, G IgE są oznaką reakcji i stanów alergicznych i IgD - można było wykryć jedynie w węźle limfatycznym i tkanki migdałków, odgrywa rolę w tworzeniu odporności lokalnego.

klas immunoglobulin

klas immunoglobulin

antygeny - o dużej masie cząsteczkowej, substancje organiczne, w szczególności zakaźnych patogenów i innych chorób, jak również różnych substancji modyfikowanych komórek wytworzonych w danej choroby (choroby autoimmunologiczne, raka).

kompleks immunologiczny - antygen-przeciwciało zaangażowane w proces immunologiczny.

Na co jest metodą ELISA.

Istnieje kilka odmian ELISA (bezpośrednie, pośrednie blokujące Konkurenci Method), w praktyce najczęściej stosowane heterogeniczne immunoenzymatycznego lub ELISA (enzymatyczny test immunosorpcyjny)

Podstawą testu immunologicznego odpowiedzi immunologicznej antygenu i przeciwciała, z wytworzeniem kompleksu immunologicznego: antygen-przeciwciało, które doprowadziło do zmian w aktywności enzymatycznej poszczególnych znaków na powierzchni przeciwciała.

Istotą sposobu ELISA

Istotą sposobu ELISA

W prosty sposób, proces ten może być podzielony na kilka etapów:



1) na powierzchni płyty lekarz otwór, ekspert oczyszcza specyficzny antygen patogenu. Podczas dodawania materiału biologicznego (morfologia krwi) specyficznej reakcji pacjenta występuje pomiędzy antygenem i pożądanego przeciwciała (immunoglobuliny). To połączenie będzie działać jako „specjalne antygenu” w następnym etapie.

2) W tym etapie tworzenie IR (kompleksów immunologicznych), - reakcja pomiędzy „specyficzny antygen” i koniugatu (to immunoglobuliny znakowane enzymem peroksydazą). Dodano specjalny chromogen. Wynikiem tej reakcji enzymatycznej jest powstawanie zabarwionych substancji w studzienkach płytki, przy czym intensywność zabarwienia zależy od liczby pacjentów immunoglobuliny (przeciwciała), znajdujących się w materiale.

3) Kolejne tam interpretacja fotometryczne przy użyciu spektrofotometru wielokanałowego porównanie gęstości optycznej badanej substancji o gęstości optycznej próbki kontrolne, matematyczne przetwarzania wyników. Ilość przeciwciała w organizmie pacjenta zależy od wysokości gęstość optyczną studzienek.

Zwykle w praktyce, zastosowanie 96-dołkowych.

Gdy pomiary gęstości optycznej (OD) obliczono objętość próbki cieczy (lub stężenia) specyficznych przeciwciał w jednostce objętości. Wynik jest następnie porównywana z próbką kontrolną.

Należy pamiętać:dla każdego systemu testowego opracowany w celu uwzględnienia wyników indywidualnych osiągnięć, standardów wydajności i patologii (czyli „wartość referencyjna”). Należy to uwzględnić przy ocenie wyników każdego studium przypadku. Poprawnie zinterpretować wyniki laboratoryjnych „Wartości referencyjne” innym laboratorium. Jest również nieprawidłowe porównać wyniki z różnych laboratoriów razem.

Podczas ustawiania reakcje testu ELISA i ma wartość taką koncepcję jako zachłannością wiązania przeciwciała.
przeciwciała zachłanności - wytrzymałość na wiązanie przeciwciała z antygenem, a ilość antygenu znajduje się powiązania z immnoglobulinami (przeciwciała). Zachłanność ma wielkie znaczenie przy ocenie rzekomej infekcji pojęcia, co jest niezwykle ważne w diagnostyce infekcji pierwotnej u kobiet w ciąży.

Podstawa zachłanność przeciwciała testu obejmuje traktowanie kompleksów immunologicznych (antygen-przeciwciało) roztworu mocznika w celu rozłożenia białka. linki Vysokoavidnye pozostają nienaruszone i niski zachłanność zniszczone. Wynik podaje się jako indeks zachłanności, wyrażona w procentach (%).

Jakie choroby są wykrywane przez ELISA diagnostyka?

1. Choroby zakaźne
1,1 wirusowe zapalenie wątroby typu A (IgM, G), B antygenów -HBsAg, HBeAg przeciwciało - HBcorAg IgM, IgG, IgG całkowitej HBcorAg HBeAg), C (przeciwciała Ig M, G HCV), D (IgM, g), e (Ig F, G) i inne.
1,2 zakażenie HIV (IgG)
1,3 cytomegalii (przeciwciała IgM, G)
1,4 Epsteina-Barra infekcji lub mononkleoz (przeciwciało IgM, G EA VCA NA wirusowe białka)
1,5 opryszczkowe zakażenie (przeciwciało IgM, G)
1,6 toksoplazmoza (przeciwciało IgM, G)
1,7 Różyczka (IgM, G)
1,8 Odra (IgM, G), brucelozy (IgM G) pseudotuberculosis (IgM, G), salmonellozy (IgM, G), zakażenie pałeczkami Shigella lub czerwonka (IgM, G), aspergiloza (IgM, G), kleszczowego zapalenia mózgu, boreliozę i wiele innych.
1,9 parazytozy (lambliozę, toksokaroza, włośnica, opistorhoz, Echinokokoza, alveococcosis i inni), w których wykrytej IgG
1,10 STD (przez choroby przenoszone drogą płciową) - mikoplazmozy (IgM G) Ureaplasmosis (IgM, G), Chlamydia (IgA, F, G), kiła (IgG)
1,11 zakażenie Helicobacter (IgG)

2. Markery chorób autoimmunologicznych oraz wskaźniki układu odpornościowego człowieka (Całkowitej IgE, całkowitej IgG, całkowitej IgA, całkowitej IgM, całkowite IgD wydzielnicze IgA, IgG, 2, lgG4, CRC krążących kompleksów immunologicznych, IgA i IgG do gliadynę i inni)

3. markery Onkologichsekie (TNF - tumor necrosis CEA - antygen rakowo-PSA - antygen specyficzny dla prostaty, hCG - ludzka gonadotropina kosmówkowa, CA 125, alveomutsin i wiele innych)

4. zaburzenia rozrodczeI (estradiol, progesteron, prolaktyna, testosteron, AFP AFP- FSH - hormon folikulotropowy i inni)

5. Choroby tarczycy (Wolnej i związanej T3, T4, tyroglobulina, tarczycy peroksydazy - TPO tyreotropina - TTG).

Ta lista nie jest bynajmniej wszystkie choroby są diagnozowane za pomocą testu ELISA.

Materiał do analizy ELISA i zasada ogrodzenia ITS

Najbardziej powszechnym materiałem dla reakcji IFA - surowica pacjenta, wykonane na czczo. Materiał ten może również służyć jako płyn mózgowo-rdzeniowy, płyn owodniowy, szklistych zawartości śluzu szyjkowego kanał i cewki wymazów.

Przygotowanie pacjentów do dostarczania materiału do IFA

Krew pobrano na czczo. Przed dostarczeniem krwi nie trzeba podejmować żadnych leków. Specyficzne leczenie (przeciwbakteryjne, przeciwwirusowe, przeciwpasożytnicze, i tak dalej), muszą zostać przerwane przez co najmniej 2 tygodnie przed rozpoczęciem badania.

IFA warunki produkcji

Materiał immunosorpcyjny test odbywa się szybko w ciągu dnia. Opóźnienia te mogą być w różnych laboratoriach z powodu nagromadzenia się pewnej ilości surowicy.

Możliwe wyniki ELISA diagnostyki

Oceniając wyniki poszczególnych zakażeń jest ważna klasa przeciwciał zidentyfikowanych i ich liczbę. To ma wpływ nie tylko kwestią etiologia infekcji (to znaczy, czy nie), lecz szacuje stopień choroby (ostre i przewlekłe), a także w obecności aktywnego zakażenia (ostre lub zaostrzenia przewlekłej) w czasie badania.

Jakie są przybliżone terminy przeciwciał (immunoglobulin - Ig)?

Najwcześniejsze IgM są. Można je zidentyfikować przez 1-3 tygodni po infekcji, charakterystycznych dla możliwych ostrej fazie infekcji. Druga sytuacja jest pojawienie się przeciwciał IgM - włączenia (lub zaostrzenia) przewlekłą. Przeciwciała IgM krążą średnio około 3 miesięcy, po czym ich liczba stopniowo zanika. Jednakże, u niektórych pacjentów, śladowe ilości IgM można wykryć w ciągu 1-2 lat po zakażeniu.

Nowoczesne systemy testowe są bardzo wrażliwe, tak że nie są niespecyficzne fałszywie dodatnich wyników (często u kobiet w ciąży). Dlatego pozytywny IgM w tej grupie pacjentów należy ponownie sprawdzić!

przeciwciała IgA pojawiają się 2-4 tygodni po zakażeniu, ale w ilości wystarczającej do wykrycia - miesiąc. Surowicy IgA syntetyzowana przez komórki krwi w śledzionie, węzłach chłonnych i śluzówkowych IgA wydzielnicza koncentrowały się na błonach śluzowych, do pełnienia swojej funkcji ochronnej - zaangażowane w odporności lokalnego.

Na 4 tygodnie po zakażeniu pojawiają się przeciwciała IgG. W większości zakażeń miana stopniowo wzrasta, z maksimum w różnych czasach (średnio 1,5-2 miesięcy), a miano pozostaje na niskim poziomie, a oznacza odporność. W niektórych chorób (mykoplazmoza, Chlamydia, rzęsistkowica) Poziom IgG nie jest wysoka, jest znacznie ograniczone z uwagi na brak odporności na tych zakażeń.

wyniki ELISA

Wykonania wykrywanie przeciwciał różnych klas:

- Izolowane wykrywania przeciwciała IgM, zakłada istnienie pierwszorzędowej
zakażenie.
- Jednoczesne wykrywanie IgM i IgG we krwi typowych dla infekcji pierwotnej
w ciągu ostatnich 23 miesięcy, a także nasilenia chorób przewlekłych. W związku z tym, obecność przeciwciał IgM w ciąży nie zawsze jest wskaźnikiem początkowej infekcji.
- Wykrywanie IgG izolowana i może wskazywać na odporności na choroby,
i przewlekłe infekcje. W drugiej sytuacji, w którym wybrany ilości przeciwciała (miano) a zmiany dynamiki miana. Typowo, badania przeprowadzono w odstępie 2-4-6 tygodni.
- Detekcja IgA lub IgM izolowane wskazują pierwotną infekcję. na
wraz z pojawieniem się IgA IgG zakłada aktywację przewlekłego zakażenia (średnio 2 tygodni od chwili zaostrzenia).

definicja Zachłanność wiązania przeciwciała IgG Jest to idealne uzupełnienie do diagnozowania infekcji pierwotnej fazie zakażenia wieloletniej, która ma swoje znaczenie kliniczne, zwłaszcza przy ocenie zagrożenia wewnątrzmacicznego zakażenia płodów. Wykrycie niskiego zachłanności IgG wskazuje na zakażenie pierwotne i określa średnią po 4-6 miesięcy po zakażeniu, rzadziej dłuższe. Niska zachłanności IgG wymaga innego dowodu laboratoryjnego zakażenia pierwotnego (IgM). Przeciwciała o wysokiej zachłanności albo są objawem choroby przewlekłe i ostre lub utworzonego odporności.

Zwłaszcza u niemowląt:u dzieci w wieku poniżej jednego roku, a czasami nawet 1,5 roku w krwi krążącej matczynych IgG do różnych zakażeń (np była penetracja przez łożysko od matki do płodu w macicy). To samo w sobie nie jest oznaką obecności zakażenia w chwili obecnej. Jeśli w wieku takjm wykryto IgM (IgM przypomnieć, że matki przez łożysko nie mogą), jest to oznaką infekcji lub zakażenia wewnątrzmacicznego nabyte po urodzeniu.

Ilościowe metody ELISA

diagnostyczne wyniki ELISA (za pomocą enzymu analizatora immunologicznego) wydaje się w poszczególnych jednostkach:
- Gęstość optyczną (OD) próbek - stężenie swoistych przeciwciał na jednostkę objętości. Im wyższa wartość OD próbki, tym wyższe stężenie przeciwciała. Niektóre wyniki wskazują współczynnik dodatni (CP) - jest gęstością optyczną próbki.
- Jednostkami stężenia przeciwciała (ng / ml lub ng / ml).
- W miana surowicy: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 i tak dalej. Miana diagnostyczne (w których zdiagnozowano tę chorobę, a nie z tym, zakażenia) dla wielu różnych chorób.
- W postaci symboli - "+", "-" (+, ++, +++, ++++) "?".
- W jakościowej oceny wartości kryterium (pozytywnej lub negatywnej).

Prawidłowo oszacować ilość przeciwciał, odmiany immunoglobulin identyfikacji klasy, a tym samym narażają stadium choroby oraz konieczność tylko lekarz może leczyć.

Nie wolno nam zapominać, że ich „wartość referencyjna” (przykłady norma), a powyżej której dany zdiagnozowana choroba (warianty patologii) opracowany dla każdego systemu testowego. „Wartości odniesienia” dla różnych systemów testowych różne.

Właściwa porównując wyniki testu ELISA, podjęte w czasie, jest to możliwe tylko w przypadku ich produkcji w tym samym laboratorium.

Udostępnij w sieciach społecznościowych:

Podobne
Plandeka testPlandeka test
Przeciwciałami (MAR-test)Przeciwciałami (MAR-test)
Badania na czynnik przeciwciał przeciwjądrowychBadania na czynnik przeciwciał przeciwjądrowych
Test igłaTest igła
Opracowali szybki test do wykrywania oznak autyzmu u dzieciOpracowali szybki test do wykrywania oznak autyzmu u dzieci
Test z deksametazonemTest z deksametazonem
Test MantouxTest Mantoux
Badanie krwi na syfilisBadanie krwi na syfilis
Karelski gorączka (choroba Ockelbo)Karelski gorączka (choroba Ockelbo)
Badanie krwi na obecność wirusa HIVBadanie krwi na obecność wirusa HIV
» » » Test immunoenzymatyczny (ELISA),